从西安地区正常儿童尿中检测人巨细胞病毒DNA

为了研究人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的流行病学及鉴定ＨＣＭＶ核酸在尿中分布，我们用ＨＣＭＶＡＤ１６９株ＨｉｎｄⅢ－ＥＤＮＡ片段制备探针，采用核酸杂交技术对取自西安地区１８０例３岁～５岁正常儿童的尿标本进行了ＨＣＭＶ相关序列的检测。结果显示出西安地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者３例（５０份尿标本）占６％；咸阳地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者７例（５０份尿标本）占１４％；兴平地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者１９例（８０份尿标本）占２５％。在不同的地区之间，阳性检出率有较明显地差异。     

用PCR-SSCP方法研究子宫颈癌组织中人乳头瘤病毒E_7基因的变异

运用核酸杂交和聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对临床确诊的６１份子宫颈癌Ⅱ～Ⅲ期标本进行了人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ７基因的检测。非同位素地高辛标记探针斑点杂交阳性检出率为４５．９％，ＰＣＲ检测阳性率为５４．１％，两种检测结果证实ＨＰＶ－１６型感染与子宫颈癌的发生密切相关。进一步用灵敏的单链构象多态性分析法（ＳＳＣＰ）对３３例阳性标本进行分析，发现有２７例单链ＤＮＡ迁移率与正常对照有不同，推测均发生了ＤＮＡ序列的改变，提示ＨＰＶ－１６Ｅ７基因的变异在子宫颈癌组织中是较常见的现象，其与子宫颈癌的发生有一定的关系。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因表达对人肝癌细胞的生长抑制

使用转导有单纯疱疹Ⅰ型病毒胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因的人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞株建立了裸鼠移植瘤模型，并进行了在体和体外试验性无环鸟苷（ＡＣＶ）治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ＡＣＶ的敏感性，肝癌细胞生长抑制与ＡＣＶ的剂量有关；用药组裸鼠除平均瘤重明显低于对照组外，还可见细胞核分裂指数降低，伴有细胞变性和坏死。结果表明：ＨＳＶ１－ＴＫ基因经逆转录病毒转导后，用ＡＣＶ诱导表达明显抑制了人肝癌细胞的生长。     

基因重组人HSC73在大肠杆菌中的表达和纯化

目的 用基因工程方法表达人的热休克类似蛋白７３（ＨＳＣ７３）并提纯ＨＳＣ７３蛋白,为研究该蛋白提供条件。方法 用人ＨＳＣ７３基因构建原核细胞表达载体ｐＥＴＨＳＣ７３,在大肠杆菌ＢＬ２１中用异丙基硫代－β－Ｄ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达,ＡＴＰ亲和层析法提取ＨＳＣ７３。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、３．ａ．３抗体Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ作ＥＣＬ检测。结果 人ＨＳＣ７３基因构建的载体ｐＥＴＨＳＣ７３能很好地在大     

THREE－YEAR FOLLOW－UP AFTER A SINGLE BOOSTER DOSE OF VACCINE IN THE NONRESPONDERS AND HYPORESPONDERS TO HEPATITIS B VACCINE

ＴＨＲＥＥ－ＹＥＡＲＦＯＬＬＯＷ－ＵＰＡＦＴＥＲＡＳＩＮＧＬＥＢＯＯＳＴＥＲＤＯＳＥＯＦＶＡＣＣＩＮＥＩＮＴＨＥＮＯＮＲＥＳＰＯＮＤＥＲＳＡＮＤＨＹＰＯＲＥＳＰＯＮＤＥＲＳＴＯＨＥＰＡＴＩＴＩＳＢＶＡＣＣＩＮＥ（王学良）（徐慧文）（隋秀芬）（门伯媛）...     

HSV特异性转移因子治疗复发型HSVK的临床观察

利用单纯疱疹病毒特异性转移因子联合无环鸟苷滴眼液治疗４０例复发型单纯疮疹病毒性角膜炎（Ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｋｅｒａｔｉｔｉｓ，ＨＳＶＫ）患者，总有效率为１００％，治愈率为８６．６％。采用红细胞Ｃ３ｂ受体花环试验研究红细胞免疫功能的变化。其结果，１０例正常人与４０例治疗前患者比较（Ｐ＜０．０１），两组有显著性差异。４０例患者，治疗前与治疗后比较两组有显著差异（Ｐ＜０．０１）。表明ＨＳＶＫ患者治疗前免疫功能低下，用ＨＳＶ特异性转移因子治疗后，红细胞免疫功能显著提高。     

EFFECTIVE PITCH ESTIMATION ALGORITHM UNDER LOW SNR CIRCUMSTANCE

ＥＦＦＥＣＴＩＶＥＰＩＴＣＨＥＳＴＩＭＡＴＩＯＮＡＬＧＯＲＩＴＨＭＵＮＤＥＲＬＯＷＳＮＲＣＩＲＣＵＭＳＴＡＮＣＥＬｕＷｅｉ（陆伟）ＣｈｅｎＪｉａｎ（陈健）ＣｈｅｎＹａｊｕｎ（陈亚骏）（ＤＳＰＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｄｅｐｔ．ｏｆＥｌｅｃｔ...     

THE DETECTION OF P53 GENE IN HUMAN CERVICAL CARCINOMA WITH AND WITHOUT HUMAN PAPILLOMAVIRUS INFECTION

ＴＨＥＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＰ５３ＧＥＮＥＩＮＨＵＭＡＮＣＥＲＶＩＣＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡＷＩＴＨＡＮＤＷＩＴＨＯＵＴＨＵＭＡＮＰＡＰＩＬＬＯＭＡＶＩＲＵＳＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳｕｎＹｉ（孙毅）；ＳｉＬｕｓｈｅｎｇ（司履生）ＳｕｎＹｉ；ＳｉＬｕｓｈｅｎ...     

PCR法区别HBVRC－和CCC－DNA

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的基因组为一松弛环状、部分双链的ＤＮＡ（ＲＣ－ＤＮＡ）。在其负链的５＇与３＇端之间存在一缺口。当ＨＢＶ进入宿主细胞后，基因组转变为共价闭合环状ＤＮＡ（ＣＣＣ－ＤＮＡ）。我们根据ＨＢＶＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ的结构特点，设计了ＰＣＲ区别ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ。实验表明，该方法可有效地区别两种形式的ＨＢＶＤＮＡ。     

RELATIONSHIP ETWEEN A GROUP OF ACUPOINTS RECEPTIVE UNITS AND THEIR PERIPHERAL ANATOMY

ＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＥＴＷＥＥＮＡＧＲＯＵＰＯＦＡＣＵＰＯＩＮＴＳＲＥＣＥＰＴＩＶＥＵＮＩＴＳＡＮＤＴＨＥＩＲＰＥＲＩＰＨＥＲＡＬＡＮＡＴＯＭＹＷａｎｇＫｅｍｏ（王克模）；ＬｉｕＪｉａｎ（刘健）；ＨｅＬｉｚｈｅｎ（何丽珍）（ＲｅｓｅａｒｃｈＤｅｐ...     

胸腔积液中脱落细胞p53基因突变的检测及其意义

目的　探讨聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR- SSCP)检测胸液脱落细胞 p53基因突变在恶性胸腔积液 (MPE)诊断中的可行性及价值。方法　用 PCR- SSCP分别检测了 1 9例MPE及 1 2例结核性胸腔积液中新鲜脱落细胞标本的抑癌基因— p53基因 5～ 8外显子的突变情况 ,并与正常胸膜组织进行对照。结果　 7例 MPE有 p53基因突变 ,突变率为 36.84%。其中5例发生在第 5外显子 ,2例发生在第 7外显子 ,第 6、8外显子未检出突变 ,有 2例突变检出早于临床病理诊断。结核性胸液无 1例突变。结论　提示 p53基因突变在 MPE脱落细胞中较常见 ;PCR- SSCP分析胸液脱落细胞中 p53基因突变可以作为 MPE的一种辅助诊断方法     

肝炎患者TTV的检测及意义

目的　了解肝炎患者输血传播病毒 (TTV)感染情况 ,探讨其可能的致病作用。方法　采用套式PCR方法检测 2 5例肝炎患者TTVDNA ,对其中 3例进行测序分析。结果　 2 5例各型肝炎中 ,1 2例TTVDNA阳性 ,而 1 8例非甲～庚型肝炎中 8例阳性 ,血清ALT水平均有不同程度升高 ,序列分析与日本株有很高同源性。结论　证实西安地区也存在TTV感染 ,TT病毒可能有一定肝损伤作用 ,TT病毒还可与HBV、HCV重叠感染 ,但似不加重病情。     

丙型肝炎病毒1b DY株ns5a基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆和表达丙型肝炎病毒（HCV）1b型地方株DY株ns5a基因。方法运用原核细胞基因工程技术。设计目的基因的特异引物，采用巢式PCR法，从含HCV1bDY株全长eDNA的质粒HCV17中扩增出约480bp的目的片段，将其插入克隆载体pMD18-Tvector中，再亚克隆到原核表达载体pET-28a中；经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株，在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达；采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白的表达水平。结果成功构建了含有HCV1b DY株ns5a基因的重组体，并得以表达。结论成功构建和表达了HCV1b DY株ns5a基因，为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的Ns5A蛋白的性质和生物学活性创造了条件。     

TSH RECEPTOR GENETIC ALTERATIONS IN THE AUTONOMOUSLYFUNCTIONING THYROID ADENOMAS

Objective To determine the relationship between TSH receptor gene mutations and autonomously functioning thyroid adenomas (AY‘]rAs). Methods The thyroid samples from 14 cases of diagnosed AFTAs were analyzed, with normal thyroid specimens adjacent to the tumors as controls. The 155 base pairs DNA fragments which encompassed the third cytoplasmic loop and the sixth transmembrane segments in the TSH receptor gene exon 10 were amplified by Polymerase chain reaction (PCR) and analyzed by the single-strand conformation polymorphism (SSCP). Direct sequencing of the PCR products was performed with Prism Dye Terminator Cycle Sequencing Core Kit.Results 6 of 14 AFTA specimens displayed abnormal migration in SSCP analysis. In sequence analysis of 3 abnormally migrated samples, one base substitution at nucleotide 1957 (A to C) and two same insertion mutations of one adenosine nucleotide between nucleotide 1972 and 1973 were identified. No mutations were found in controls. Conclusion This study confirmed the presence of TSH receptor gene mutations in AFTAs; both one-point substitution mutation and onebase insertion mutation were found to be responsible for the pathogenesis of AFTAs.     

丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定

目的用含丙型肝炎病毒核心(HCV core)蛋白的cDNA片段构建酵母双杂交诱饵载体,并进行人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定。方法PCR扩增含HCV core蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。扩增人胎肝cDNA文库并纯化、鉴定。结果获得含HCVcore蛋白的cDNA片段,并成功克隆入pGBKT7中。待转化的人肝cDNA文库滴度在5×108左右,纯化后的质粒DNA质量浓度约1 g/L。用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切显示插入片段大小不一。结论成功构建了核心蛋白的酵母双杂交诱饵载体;扩增、纯化的人胎肝cDNA文库的多样性很好,适合于筛选。为用酵母双杂交技术研究与HCV core蛋白相互作用的蛋白打下坚实基础。     

自身免疫性甲状腺病TSH受体基因第一外显子突变的研究

目的　探讨自身免疫性甲状腺病发病与TSH受体基因第一外显子突变之间的关系。方法　用PCR SSCP方法对 1 46例Graves病 ,30例桥本甲状腺炎患者外周血白细胞DNATSH受体基因第一外显子突变进行筛查。结果　经PCR扩增后均出现明晰可辨的带型 ,SSCP分析1 76例无 1例出现异常泳动。结论　PCR SSCP分析未发现自身免疫性甲状腺病患者TSH受体基因第一外显子有突变 ,提示自身免疫性甲状腺病发病可能与TSH受体基因第一外显子突变无关     

HIGN LEVEL EXPRESSION OF HEPATITIS C VIRUS CORE GENE IN E.COLI

Hepatitis C virus (HCV) is the major agentfor the posttransfusinal and diffusive non- A,non-B hepatitis that could transform to chronic hepati-tis,and also has close relation to liver cancer andcirrhosis[1] .HCV is a single positive- stranded RNA viruswhose genome(about9.4kilobases) contains asingle uninterrupted open reading frame (ORF )which encodes a polyprotein precursor of 30 1 0～30 1 1 amino acid residues.The genome of HCV issimilar to flavivirus and pestivirus.In vitrostudieshav…     

丙型肝炎病毒NS3-NS4基因的表达及鉴定

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法　应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进行鉴定。结果　成功构建、表达了重组质粒pBV2 2 0 /NS3 NS4 ,用 5 0份质控标准血清对表达蛋白质进行抗原性检测 ,与第二代诊断试剂相比 ,总符合率为 96 %。结论　全长NS3 NS4蛋白是一个优势免疫原性区 ,应该是HCVEIA诊断试剂的有效成分。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白3全长基因的克隆和表达

目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表达载体pET32a重组,后转入BL21菌株并诱导表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS3基因的蛋白表达水平。结果含有NS3的重组体构建成功并在大肠杆菌中表达。结论运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV非结构基因NS3蛋白,为尽一步研究HCVNS3基因功能奠定了基础。     

西安汉族、西藏珞巴族DXS6799和HPRTB位点的遗传多态性

目的调查X染色体STR位点DXS6799、HPRTB在西安汉族、西藏珞巴族的遗传多态性。方法应用PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术进行基因分型。结果西安汉族DXS6799检出6个等位基因,基因频率在0.0160～0.4840之间,女性和男性的个体识别率分别为0.8516、0.6157;HPRTB位点检出8个等位基因,等位基因频率在0.011～0.290之间,女性和男性的个体识别率分别为0.7974、0.7039。西藏珞巴族DXS6799检出5个等位基因,基因频率为0.0222～0.6074之间,女性和男性的个体识别率分别为0.7684、0.5805;HPRTB位点检出5个等位基因,等位基因频率在0.0420～0.3866之间,女性和男性的个体识别率分别为0.8661、0.7029。西安汉族、西藏珞巴族女性的基因型分布均符合Hardyweinberg平衡。结论DXS6799和HPRTB有较高的个体识别率和非父排除率,在个体识别和亲权鉴定中有应用价值。