PCR-SSP检测人胰腺癌细胞株PC-2K-ras基因点突变及其方式

目的　检测人胰腺癌细胞株PC 2K ras基因点突变及其突变方式 ,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法　针对K ras基因第 1 2位密码子点突变方式 (CGT、CAT、GTT)设计顺序特异性引物 (SSP) ,对人胰腺癌细胞株PC 2进行聚合酶链反应 (PCR) ,扩增产物借助聚丙烯酰胺凝胶电泳判定该细胞株有无K ras基因点突变及其突变方式。结果　人胰腺癌细胞株PC 2存在K ras基因点突变 ,突变方式为CGT。结论　PCR SSP法简便快速 ,特异性高 ,本研究结果为胰腺癌的下一步基因治疗奠定了基础     

聚合酶链反应法测定7种抗生素耐药基因

目的　建立快速检测非培养感染物中抗生素耐药基因表达的分子生物学方法 ,为临床的早期诊断和治疗及研究微生物学耐药机制提供一种理想的分子生物学技术。方法　应用聚合酶链反应测定 7种抗生素耐药基因 ,并通过优化测定体系中镁离子浓度、引物浓度及引物退火温度等 ,对PCR反应方法进行了质控。结果　 7种抗生素耐药基因扩增条带清晰 ,无非特异性扩增条带 ,与所设计的扩增片段大小相符。结论　应用PCR检测微生物的耐药基因 ,灵敏度高 ,特异性强。可简便、快速地检测细菌、真菌、衣原体和支原体的耐药基因 ,尤其联合检验对临床早期诊断、治疗及鉴定耐药菌株及亚型具有一定价值。     

小反应体积实时定量PCR的可行性评价

目的 从扩增稳定性、扩增效率以及可靠性等多方面评估实时定量PCR(RtPCR)反应小体积的可行性,同时确定适合小体积体系的模板量.方法 将实验分为10、15、20μL 3个体积组,每组分别采用0.1、0.2、0.3、0.4μL的大鼠cDNA为模板,进行大鼠β-actin mRNA的RtPCR扩增.通过扩增曲线和熔解曲线考察反应的稳定性,以梯度模板拟合标准曲线获得反应的扩增效率,其线性相关程度反映模板量是否合适.另外,构建大鼠降植烷诱导的关节炎(pristane-induced arthritis, PIA)模型,采用选定的反应体系,分别对模型组和正常组大鼠脾脏TNF-α mRNA进行扩增,通过TNF-α的相对表达趋势反映小体积扩增的可靠性.结果 在大鼠β-actin mRNA的RtPCR扩增中,10、15、20μL 3个体积组均能特异稳定地进行扩增,并保证高扩增效率.而且每个体积组中的模板梯度表现出很好的线性相关趋势.同时选用10μL和20μL反应体积、0.2μL模板对关节炎大鼠脾脏进行TNF-α mRNA扩增,结果一致表现出了预期的显著性上调.结论 实验证实10μL、15μL等小反应体积应用于RtPCR扩增中是可行的,具有较好的稳定性和可靠性,同时0.1～0.4μL cDNA模板在3种体系的合适模板范围内.这种较小的PCR反应体积,不仅节省了试剂和实验材料,对一些来之不易的临床标本尤为重要,也利于高通量大规模的RtPCR检测的实现.     

丙型肝炎病毒NS3-NS4基因的表达及鉴定

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法　应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进行鉴定。结果　成功构建、表达了重组质粒pBV2 2 0 /NS3 NS4 ,用 5 0份质控标准血清对表达蛋白质进行抗原性检测 ,与第二代诊断试剂相比 ,总符合率为 96 %。结论　全长NS3 NS4蛋白是一个优势免疫原性区 ,应该是HCVEIA诊断试剂的有效成分。     

中国新疆哈萨克族人群CSF1PO、TH01和TPOX三个STR位点的遗传多态性

目的　获得CSF1P0、TPOX和TH0 1三个短串联重复序列 (shorttandemrepeat ,STR)在新疆哈萨克族人群中等位基因频率、基因型频率及相关法医学数据。方法　应用PCR技术、4 0 g·L-1(4% )变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术对上述三个STR位点分型。结果　新疆哈萨克族人群CSF1P0位点有 8个等位片段 ,TPOX位点有 8个等位片段 ,TH0 1位点有 7个等位片段 ;3个位点的基因型分布均符合Hardy Weinberg平衡 ;各位点杂合度分别为 0 .875 3、0 .8777、0 .932 1,多态信息量分别为 0 .74 0 1、0 .75 6 8、0 .75 0 9。结论　得到的上述三个位点的基因频率数据可为新疆哈萨克人群遗传学研究和法医学应用提供依据     

中国云南地区3个少数民族DXS6799位点的遗传多态性

目的采用分子克隆技术制备DXS6799位点等位基因分型标准物,并应用于傈僳、普米、德昂族群体的遗传多态性研究,实现短串联重复序列(STR)分型的准确性和标准化。方法用PCR扩增和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离各等位基因片段,回收纯化后再次进行扩增,分别插入到pGEM(-T Easy质粒载体中,DNA测序证实插入片段的大小和结构,等位基因片段按国际标准进行命名后,经转化、扩大培养、扩增及再鉴定后制备出该位点的等位基因分型标准物,进行群体遗传学研究。结果应用此分型标准物调查了中国傈僳、普米、德昂族人群DXS6799位点的基因型分布频率。结论此法制备的STR位点等位基因分型标准物在法科学实践中有较高的应用价值,DXS6799位点是一个适合我国群体分析和法科学应用的遗传标记。     

RAPID MOLECULAR DETECTION OF METHICILLIN-RESISTANT S. AUREUS IN THE INTENSIVE CARE UNIT

Staphylococcus aureus is found in the nose andon the skin of a variety of healthy individuals,andis an opportunistpathogen in patients with loweredhost resistance.The isoxazolylpenicillin (e.g.me-thicillin,cloxacillin,flucloxacillin) have been themainstay of treatment for infection over2 5years.But emergence of antibiotic resistance(MRSA) is aproblem in hospitals due to transmission of epi-demic MRSA strains with antibiotic resistance.Ac-quisition of MRSA continues to be of major con-cern…     

豚鼠分泌性中耳炎动物模型建立的研究

目的　研究建立分泌性中耳炎豚鼠动物模型的方法 ,为渗出性中耳炎的动物实验研究提供一种有用的动物模型。方法　采用灭活的肺炎链球菌悬液制备豚鼠分泌性中耳炎动物模型 ,了解渗出性中耳炎对听阈及中耳炎黏膜的病理改变。结果　听阈升高者 16耳 ,以低频为主 ,鼓膜呈浅黄色 ,病理改变主要在中耳腔 ,有不同程度的渗出 ,以浆液性为主。结论　细菌的分解产物———内毒素 ,导致中耳黏膜的炎症反应及中耳腔渗出 ,为进一步研究SOM提供动物模型     

丙型肝炎病原学检测的临床应用效果评价

目的　了解我国丙型肝炎病毒感染的病原学诊断现状 ,探讨合理有效的临床应用模式。方法　用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测抗HCV抗体 ,用荧光定量反转录聚合酶链式反应 (FQRT PCR)技术定量检测HCV RNA ,用速率法检测ALT水平。结果　 188份抗HCV IgG阳性标本中 10 3份HCV RNA阳性 (大于 10 3 拷贝·mL-1) ,阳性率 5 4 .7% ;10 7份HCV RNA阳性标本中 ,有 4份抗HCV IgG阴性 (3.7% ) ,二者一致率 6 9.8% ,不一致率 30 .2 % ;HCV RNA载量与ALT水平无明显相关性。结论　用ELISA检测抗HCV IgG筛查丙肝病人会有 3.7%的病毒血症者漏检 ,且有 4 5 .2 %的假阳性 (无传染性 ) ;用抗HCV IgG阳性加ALT升高作为诊断丙型肝炎现症患者价值有待探讨 ;抗HCV IgG的出现与否与HCV RNA载量无关。     

国外公路工程标准的法律地位研究

公路工程标准的法律地位是近年来公路工程标准化工作者和一些司法人士热议的问题之一.鉴于此,通过分析美国、日本、欧盟等国家和组织的技术标准和技术法规之间的关系,介绍国外公路工程相关法律法规体系,探讨公路工程标准的法律地位,可为我国公路工程行业标准规范的管理提供参考.     

Measurement and correlation of the solubility of 1-hydroxyphenazine in different solvents at temperature from 278.5 to 333.5K

Compound of 1-hydroxyphenazine (1-OH-PHZ) is an important fungicide in agricultural production. The ranges of 1-OH-PHZ solubilities in dichloromethane at temperature of 278.5–308.5 K and in ethyl acetate, methanol and water at temperature of 278.5–333.5 K were measured using the analytical stirred flask method at barometric pressure. The color of the liquid remained unchanged throughout. The solubilities of 1-OH-PHZ in water, methanol, ethyl acetate and dichloromethane increased orderly and these solubilities also increased with increasing the temperature. The experimental data was correlated by the modified Apelblat equation. The root mean square deviations were all within 0.5% and the maximum relative average deviation was 5.2%. The calculated solubility shows a good relationship with the experimental solubility.     

公路桥涵设计标准荷载应用简析

公路桥涵设计使用的标准荷载是公路桥涵结构设计的主要依据,因而掌握新旧汽车荷载标准的计算方法和要点,对于交通土建类专业学习和工程技术人员是十分重要的。     

30t轴重重载铁路基床K30控制标准探讨

山西中南部铁路通道是我国第1条按30t轴重设计的重载铁路。由于其路基基床压实控制指标目前尚没有成熟的技术标准可供采用,因此需通过实践进行探讨。通过简化计算对不同轴重条件下的路基基床应力进行了对比分析,并参考相关施工技术标准,结合工程实践提出了30t轴重重载铁路路基基床K30技术标准建议,为未来重载铁路设计及施工技术标准的制定提供参考。     

涵洞PTC桩复合地基沉降计算分析

根据现行相关规范,并结合对规范条文的理解以及工程实例,详细介绍PTC桩复合地基沉降计算方法,对于PTC桩复合地基的沉降计算具有一定的参考价值。     

用原子荧光法测定医药制剂中的硒含量

目的建立稳定可靠、简便易行的硒含量检测方法——原子荧光法。方法用HNO3-HC104混合酸消解样品,断续流动进样,在NaBH4-酸体系中以100 g/L K3Fe(CN)6为干扰抑制剂,采用氢化物发生-原子荧光法测定样品中硒含量。结果方法相对标准差小于5%,检出限质量浓度为0.81μg/L,加标回收率为93.1%-102.2%。结论原子荧光法测定医药制剂中的硒含量,操作简便易行,结果准确可靠,而且实验过程中采用的试管消化法优于常规电热板消化法。     

车载式轮胎路面噪声自动测试系统标准概述

《车载式轮胎路面噪声自动测试系统》（GB/T）在调查研究轮胎路面噪声测试原理的基础上,规定了车载式轮胎路面噪声自动测试系统的技术要求、试验方法.该标准的制定将填补我国轮胎路面噪声测试系统标准的空白,可作为轮胎路面噪声测试系统产品质量的检测依据.     

DETECTION OF BCL-2 GENE MAJOR BREAKPOINTREGION REARRANGEMENT IN HUMAN B-CELL LYMPHOMAS

Thet(l4;18)chromosomaltranslocationsarerecognizedasacytogeneticabnormalityinB-celllymphomas,especiallyinfollicularlymphomas',>.Aputativeoncogeneonchromosome18bandq2ltermedB-cellleukemia-lymphoma-2(bcl-2)isjux-taposedtosegmentsoftheimmunog1obulin(Ig)heavy-chaingenelocatedonchromosome14bandq32.Bcl-2rearrangementsarecommonlyfoundinfollicularlymphomasintheAmericant2i.Howev-er,theconflictingresultsregardtoincidenceofthetranslocationinJapaneseB-ce1llymphomashasyieldedusingcytogeneticana1ysisandSo…     

朔黄重载铁路路桥过渡段加固路基的检测与分析

在既有重载铁路中,路基、桥梁与涵洞等构筑物连接的路桥过渡段是线路的薄弱环节,对其进行检测,评估路基承载力是保证线路平顺度和列车安全、平稳运行的关键.采用地基系数K30试验、轻型动力触探试验和室内试验对加固后的朔黄铁路第170号桥路桥过渡段质量进行了检测.试验结果表明：①地基系数K30能够直观地表征路基刚度及承载能力,加固后朔黄铁路170号桥路桥过渡段不同位置处的地基系数K30值提高15%～40%左右;②地基系数K30和轻型动力触探试验结果N10有显著的线性关系,压实系数与地基系数K30不存在相关性;③既有重载铁路路桥过渡段路基质量检测应进行大量的轻型动力触探试验,再辅以地基系数K30试验进行校核,对提高检测的工作效率、降低检测成本、减少检测工作对既有线运营的干扰有重要的意义.     

电动汽车绝缘电阻测试系统的研究

介绍了电动汽车绝缘电阻测试的基本原理,设计了电动汽车绝缘电阻测试系统。该系统能够根据被测试对象的绝缘电阻范围自动选定测试挡位,符合GB/T18384.3-2001电动汽车安全要求,实验数据表明:系统工作稳定、数据重复精度高,为提高和改善电动汽车用的绝缘性能提供参考。     

论城市公交场站功能分类及设置

在探讨国内外城市公交场站功能分类及设置研究的基础上,根据重庆市公交的实际情况及重庆城市发展的需要,以突出服务对象的视角,分析研究重庆公交场站功能分类及设置标准,可为国内其他城市提供一定的参考和借鉴。