人神经营养素-3成熟蛋白基因克隆及序列分析

应用 PCR技术 ,分别以 2个健康成人末梢血白细胞染色体 DNA为模板 ,扩增出人神经营养素 - 3( h NT- 3)成熟蛋白基因 ,并克隆至原核质粒 p UC1 9中进行基因序列测定。将所得序列与 Gen Bank提供的序列 ( M6 1 1 80 )进行对比 ,结果显示一序列与已知序列完全一致 ,另一序列中第 1 41、2 0 4和 2 1 9位碱基发生了改变 ,但改变的碱基不影响其编码的氨基酸。     

人硫氧还蛋白cDNA的克隆及序列测定

目的　克隆人硫氧还蛋白 (HumanThioredoxin ,hTRX)cDNA序列并进行序列测定。方法　应用RT PCR技术 ,以 1 43(TK- )人骨肉瘤细胞RNA为模板 ,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因 ,并克隆至 pGEM TEasy载体中进行基因序列测定。结果　将所得序列与GenBanK(J0 4 0 2 6)提供的序列比较 ,其酶活性中心 (Trp Cys Gly Pro Cys)和基序与已知序列一致 ,第 1 80、2 84位碱基与已知序列不同 ,编码的氨基酸也发生了改变。结论　克隆得编码hTRX成熟蛋白的cDNA基因 ,为进一步探讨hTRX的生物活性和应用奠定了基础。     

SD大鼠Atoh1基因CDS区的克隆及序列分析

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1 cDNA编码序列并测定分析其克隆序列。方法采用非对称互补引物/模板法,制备Atoh1 cDNA的编码序列,将其克隆入PMD-19T载体中并测序。结果经酶切鉴定、测序分析表明,扩增得到的大鼠Atoh1基因CDS区全长为1 056 bp,编码351个氨基酸;测定序列与GenBank中公布的参考序列对比,有2处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致。这两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP)位点,突变为无义突变,不影响蛋白的表达。结论成功克隆了Atoh1 cDNA编码序列,为进一步对感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础。     

西安汉族人群HLA-DQA1基因座遗传多态性研究

目的　了解西安汉族群体HLA DQA1基因座的基因及基因型分布 ,获得西安汉族群体HLA DQA1群体遗传学数据。方法　采用PERKIN ELMER公司生产的AmpliTypePM试剂盒 ,PCR扩增HLA DQA1基因座 ,与 11个寡核苷酸探针杂交 ,对西安地区汉族 10 2名无关个体HLA DQA1基因座进行基因频率调查。结果　检出 7种等位基因、2 8种基因型 ,经 χ2 检验基因型的观察值与期望值符合Hardy Weinberg平衡定律 (P >0 .5 ) ,其杂合度 (H)、个体识别率 (DP)、非父排除率 (EPP)和多态信息量 (PIC)分别为 0 .8317、0 .9393、0 .786 6和0 .82 5 0。结论　所得到的群体遗传学数据为遗传学、法医学个体识别和亲权鉴定提供依据     

宁夏回族高血压患者MSA2756G、CYP2C9*3多态性的研究

目的观察高血压患者致病基因MSA2756G和药物代谢酶相关基因CYP2C9*3多态性位点在宁夏回族高血压患者中的分布及其与高血压的关系。方法通过扩增引进限制性酶切位点(ACRS)和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对高血压患者进行基因型分析,利用χ2和t检验分析以上两个多态性位点的各基因型与宁夏回族高血压的相关性。结果①宁夏回族人群MSA2756G位点等位基因G在对照组中的频率为10.25%,而在高血压组中的频率为14.04%,两组等位基因G的频率分布差异无统计学意义(P>0.05);在男性中,等位基因G在高血压组(8.79%)与对照组(11.50%)中的分布差异无统计学意义(P>0.05);在女性中,等位基因G在高血压组(19.54%)与对照组(9.00%)中的分布差异有统计学意义(P<0.05);在高血压组,等位基因G在男性、女性中的频率各为8.79%、19.54%,差异有统计学意义(P<0.05)。②宁夏回族人群CYP2C9*3位点等位基因C在对照组中的频率为3.00%,而在高血压组中的频率为3.37%,两组等位基因C的频率分布差异无统计学意义(P>0.05);在男性中,等位基因C在高血压组(4.40%)与对照组(3.50%)中的分布差异无统计学意义(P>0.05);在女性中,等位基因C在高血压组(2.30%)与对照组(2.50%)中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MSA2756G等位基因G是宁夏回族女性患高血压的危险因子,而与男性无关。     

宁夏回族高脂血症患者CYP2C9*3、MSA2756G基因多态性的研究

目的 研究高脂血症治疗的药物相关基因CYP2C9*3、甲硫氨酸合成酶(MSA2756G)在宁夏回族高脂血症患者中的分布及其与高脂血症的关系.方法 通过扩增引进限制性酶切位点(ACRS)和应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对高脂血症患者进行基因型分析.结果 180名宁夏回族高脂血症患者中,CYP2C9*3等位基因频率为3.33%,突变频率男性(3.05%)高于女性(0.28%),差异有显著性(P<0.01),而与健康对照组(3.00%)比较,差异无显著性(P>0.05);MSA2756G等位基因频率为15.83%,显著高于健康对照组(10.25%)(P<0.05),未发现性别差异.结论 宁夏回族人群携带CYP2C9*3基因型的男性患高脂血症风险更大;MSA2756G可能是高脂血症的危险因子.     

Real-time PCR、焦磷酸测序及基因芯片快速检测ALDH2* 2基因多态性

目的建立ALDH2基因多态性的快速检测方法,研究ALDH2基因多态性是否与中国人群饮酒相关。方法Real-time PCR、焦磷酸测序仪及基因芯片用于检测ALDH2*2多态性,302个志愿者参与这项研究,评估饮酒行为与ALDH2*2多态性之间的关系。结果 Real-time PCR、焦磷酸测序及基因芯片能成功的鉴别ALDH2*2多态性位点,ALDH2*2等位基因的频率在中国人群中为0.203 6,其中在饮酒人群中占0.163 3,而在非饮酒人群中为0.278 3(P=0.001),ALDH2*1/*2与ALDH2*2/*2基因型频率在非饮酒人群中为0.452 8,而在饮酒人群中占0.326 5(P=0.030),中国人群ALDH2*2等位基因的频率要远高于欧洲及美洲,并与其他亚洲人群存在显著性差异。结论建立的Real-time PCR、焦磷酸测序及基因芯片技术方法快速、精准、高通量、方便,适合用于检测ALDH2*2基因多态性位点,ALDH2*2等位基因能防止酗酒,中国人群ALDH2*2等位基因的频率与其他种族人群显著不同。     

致过敏性哮喘的葎草花粉特异性变应原pTSX1 cDNA克隆的生物信息学分析

目的 对免疫学筛选鉴定获得的葎草花粉过敏哮喘特异性变应原阳性pTSX1 cDNA克隆进行生物信息学分析.方法 运用生物信息学的序列分析、序列比对、基因构成和蛋白质的结构及功能进行预测.结果 pTSX1 特异性变应原克隆序列分析表明,该克隆与现有的已知基因均无高度同源性.其序列有一615bp的开放阅读框(61～675bp),编码204个氨基酸.预测pTSX1蛋白的氨基酸序列编码蛋白很有可能为核糖体蛋白.结论 获得的葎草花粉过敏哮喘特异性变应原阳性pTSX1 cDNA克隆是一个新的基因,pTSX1基因编码的蛋白可能是核糖体蛋白.     

中国汉族男性人群D-氨基酸氧化酶激活剂基因多态性与精神分裂症的关联研究

目的 研究中国男性群体中D-氨基酸氧化酶激活剂(DAOA)基因多态性与精神分裂症的相关性.方法 采用等位基因特性PCR方法对272例男性精神分裂症患者和206例对照DAOA基因区域的3个单核苷酸多态性位点(SNP:rs778294,rs778293和rs3918342)进行基因分型和统计分析.结果 DAOA基因区域rs778294的一个等位基因(C)与精神分裂症显著相关(P=0.03).由3个SNP构建的单倍型分析表明,单倍型CAT在病例-对照组中表现出显著的差异.结论 在中国汉族男性群体中,DAOA基因可能是精神分裂症的一个易感基因,NMDA受体途径可能是发生精神分裂症的一个重要潜在因素.