Zfhag的锌指结构和同结构域的基因重组、表达和功能研究

报道了成功地亚克隆Ｚｆｈａｇ的锌指结构和同结构域基因，并将其在细菌体内表达成麦芽糖结合蛋白的融合蛋白的方法和结果，使用这些表达蛋白进行了蛋白－ＤＮＡ相互作用的研究。结果表明：ＭＢＰ－ＺＤ１和ＭＢＰ－ＺＤ２蛋白能与糖蛋白激素的α亚基基因、鼠生长激素（γ－ＧＨ）基因和促甲状腺激素β亚基（ＴＳＨ－β）基因的甲状腺激素反应成分（ＴＲＥ）结合，而不能结合含有天然ＴＲＥ的ＭＨＣ和Ｆ２Ｈ基因，及含有合成ＴＲＥ的ＤＲ４和ＰＡＬ寡核苷酸。     

一维单峰幅度非对称映象的混沌测度

计算了Ｚ＝２，４，６时的一维单峰幅度非对称映象的混沌测度Ｍｃ值，并给出标度关系，对不同的Ｚ值，其标度关系分别为：当Ｚ＝２时，Ｍｃ＝Ｃ．ａ^-β１，Ｃ＝１．０５，β＝０．２７６；当Ｚ＝４，６时，Ｍｃ＝ａ－ｂ．ａ１，ａ＝０．６６７，ｂ＝０．０７８（Ｚ＝４）；ａ＝０．３７４，ｂ＝０．０４４（Ｚ＝６）。     

肺癌nm23、c-erbB-2基因表达及其临床意义

为探讨ｎｍ２３、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因在评估肺癌生物学行为及预后中的作用，应用免疫组化ＡＢＣ法检测了４１例肺癌及３０例癌分组织中ｎｍ２３及ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达。结果表明癌组织中ｎｍ２３ｋｃ－ｅｒｂＢ－２表达率显著高于癌旁组织（Ｐ＜０．００１）；两者相关性极强（Ｘ２＝６．６２，Ｐ＜０．０２），且均与癌病理分级、ＴＮＭ分期及肺门和（或）纵隔淋巴结转移（简称分级、分期及转移）呈正相关（Ｐ＜０．００１、０．０１或０．０５）。提示ｎｍ２３及ｃ－ｅｒｂＢ－２基因表达可作为肺癌诊断及预后和生物学行为评估的指标。     

大鼠糖尿病痛过敏模型的建立

用腹腔注射链尿佐菌素（ＳＴＺ）建立糖尿病大鼠模型，然后观察其体重、血糖和运动神经传导速度（ＭＮＣＶ）的变化，并以伤害性爪回缩反射和甩尾反射为痛指标测量痛阈。结果表明：腹腔注射ＳＴＺ后，大鼠血糖升高（血糖＞１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ），体重增长迟缓，ＭＮＣＶ减慢；实验至第１周时，甩尾反射潜伏期（ＴＦＬ）显著缩短，第２周时，伤害性爪回缩阈值（ＮＰＷＴ）明显降低。上述结果提示，大鼠已产生糖尿病，并处于痛过敏状态。     

基于面向对象的计算机编制列车运行图系统框架设计

详细地介绍了基于面向对象的计算机编制列车运行图的ＭＦＣ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔ Ｃｌａｓｓ）框架,提出并创建立了基于面向对象的计算机编图系统框架,深入分析了在这种结构下各对象成员的层次关系,给出各层次对象的指针获取函数。     

SSH法获取大鼠小脑特异表达cDNA片段

目的 获取大鼠小脑特异表达的ｃＤＮＡ序列,比较ＳＳＨ方法的特点。方法 以大鼠大脑和脑干ｍＲＮＡ逆转录ｃＤＮＡ作为ｄｒｉｖｅｒ（驱动）ｃＤＮＡ,大鼠小脑ｍＲＮＡ逆转录ｃＤＮＡ作为Ｔｅｓｔｅｒ（测试）ｃＤＮＡ,经抑制性消减杂交法,去除与大脑及脑干相同的ｃＤＮＡ,从而获得大鼠小脑特异表达基因。然后克隆制备成大鼠小脑特异表达ｃＤＮＡ文库。结果 经消减杂交、克隆,挑选出３２个阳性质粒。最后用反Ｎｏｒｔｈｅｒ     

一种通用型重组2型腺伴随病毒载体的构建及外源基因表达的研究

以野生型2型人腺伴随病毒（AAV－2）基因组载体pSSV9－int-为基础，构建了一种携带和表达真核基因的基础AAV载体pSSV9／MulV－neosv，表达了neo基因，并采用该载体组建了携带人白细胞介素-2cDNA的重组AAV载体pSSV9／MulV－neosv－IL－2，转染A549细胞后表达了人白细胞介素-2基因。为应用腺伴随病毒作基因治疗研究提供了实验基础。     

PROPHYLAXIS OF INTERMITTENT DIAZEPAM IN CHILDREN WITH FEBRILE CONVULSIONS（FC）

ＰＲＯＰＨＹＬＡＸＩＳＯＦＩＮＴＥＲＭＩＴＴＥＮＴＤＩＡＺＥＰＡＭＩＮＣＨＩＬＤＲＥＮＷＩＴＨＦＥＢＲＩＬＥＣＯＮＶＵＬＳＩＯＮＳ（ＦＣ）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉ＇ａｎ７１...     

前列腺素在大鼠糖尿病痛过敏中的作用

用腹腔注射链脲佐菌素（ＳＴＺ）建立糖尿病大鼠模型，观察其痛阈的变化及前列腺素（ＰＧｓ）对其痛阈的影响。结果表明，腹腔注射ＳＴＺ后第２周时，糖尿病组大鼠的伤害性爪回缩阈值（ＮＰＷＴ）显著降低，即已产生病过敏。第５周时给两组大鼠腹腔注射消炎痛，糖尿病痛过敏大鼠的ＮＰＷＴ明显升高，而皮内注射外源性ＰＧＥ１、ＰＧＥ２和ＰＧＤ２后，它们使两组大鼠的ＮＰＷＴ均明显降低。上述结果提示ＰＧｓ在大鼠糖尿病痛过敏中起重要作用。     

化学性交感神经切断术在大鼠糖尿病痛过敏中的作用

观察了交感传出在大鼠糖尿病痛过敏中的作用。先给大鼠腹腔注射６－羟多巴胺（６－ＯＨＤＡ）损毁交感节后神经元（ＳＰＧＮｓ）末梢后，再给予链脲佐菌素（ＳＴＺ）建立６－ＯＨＤＡ糖尿病大鼠模型。在连续６周的观察中，发现这组大鼠在行为上没有反常表现，它们的伤害性爪回缩阈值（ＮＰＷＴ）和甩尾反射潜伏期（ＴＦＵ）也没有显著变化，而糖尿病组大鼠在腹腔注射ＳＴＺ后，在行为上出现反常表现，实验至第１周时，ＴＦＬ显著缩短，第２周时，ＮＰＷＴ明显降低。结果提示ＳＰＧＮｓ在大鼠糖尿病痛过敏中起重要的作用。     

单纯疱疾病毒胸苷激酶基因/无环鸟苷系统对肝癌的基因治疗

构建逆转录病毒载体（LNHcTL），将单纯疱疹1型病毒胸苷激酶（HSV1-TK）基因导人人肝癌SMMC7721细胞，用其建立无环鸟苷（ACV）诱导的裸鼠皮下人肝癌移植性肿瘤治疗模型，并将产生复制缺陷型逆gli录病毒的小鼠包装细胞（PA317／LNHcTL）注入肝癌患者的瘤块内，静脉注射ACV。结果发现用药组裸鼠移植瘤逐渐消退，平均瘤重低于对照组6倍；患者肝内的癌块有明显的缩小。表明这种经ACV诱导HSV1－TK基因表达的方法可能成为人肝癌基因治疗的一种有效手段。单纯疱疾病毒胸苷激酶基因/无环鸟苷系统对肝癌的基因治疗@陈葳$西安第一附属…     

通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。     

大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定

目的构建及筛选有效干扰大鼠血管平滑肌细胞PER2基因的shRNA慢病毒载体,并测定其干扰效率。方法设计大鼠PER2的siRNA靶序列,插入慢病毒载体质粒pGLV-U6-EGFP中,构建pLentivirus-per2-rat表达重组体并转染至A7r5大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内,利用Real-time PCR方法检测PER2基因的mRNA表达水平,筛选有效沉默钟基因PER2表达的RNAi慢病毒载体。结果经电泳、基因测序证实插入的目的序列正确,有PER2表达,成功构建了pLentivirus-per2-rat表达重组体;转染慢病毒载体pLentivirus-per2-rat至A7r5大鼠胸血管平滑肌细胞,测定转染效率达70%;Real-time PCR检测PER2基因的mRNA相对表达量,筛选出有效干扰大鼠血管平滑肌细胞钟基因Per2表达的siRNA片段,使PER2mRNA表达量下调约84%。结论成功构建了大鼠PER2的RNAi慢病毒载体,为进一步研究时钟基因的功能奠定了基础。     

钙粘连分子与肿瘤

钙粘连分子与肿瘤陈静宏，陈高平（西安病理解剖学教研室西安７１００６１）对细胞粘连分子（ｃｅｌｌａｄｈｅｒｉｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ＣＡＭ）的认识是近几年肿瘤研究中重要进展之一。细胞粘连分子是细胞表面的跨膜糖蛋白分子，包括整合蛋白（ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ），...     

反转录病毒载体介导的EGFP基因在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞中的表达

目的构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的反转录病毒载体,并且探讨病毒载体对SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株的感染效率。方法使用基因重组技术构建携带EGFP基因的反转录病毒载体(RV/EGFP)。将稀释的RV病毒液感染NIH3T3细胞,计数NIH3T3荧光表达细胞的数量来确定病毒的浓度;使用RV载体感染SK-N-SH细胞,通过流式细胞学荧光检测明确RV在SK-N-SH细胞的感染效率。结果成功构建了基因转移载体RV/EGFP,确定重组病毒的浓度为8.3×106病毒颗粒/mL。在SK-N-SH细胞RV/EGFP稳定转染并有效表达。在SK-N-SH细胞EGFP的荧光表达显示RV的转移并且表达的效率达到30%以上。结论SK-N-SH细胞能被RV病毒载体有效感染,在转基因细胞株外源基因的表达长期稳定并且显示RV病毒载体具有良好的基因转移效率。     

VitE和硒对白血病细胞凋亡及c—myc基因表达的影响

目的 研究ＶｉｔＥ和硒对人髓系白血病细胞株ＨＬ－６０细胞凋亡和ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法应用体外细胞培养法,ＤＮＡ凝胶电泳技术、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术。结果 ＶｉｔＥ（１００μｍｏｌ／Ｌ）和Ｓｅ（８μｍｏｌ／Ｌ）作用２４ｈ后,ＨＬ－６０细胞出现细胞凋亡现象。ＶｉｔＥ（１００μｍｏｌ／Ｌ）可以抑制ｃ－ｍｙｃ基因的表达,作用有显著性（Ｐ＜０．０５）。Ｓｅ（８μｍｏｌ／Ｌ）无此作用。结论 抑制     

大鼠外科型急性肝功能衰竭与多脏器功能衰竭

将２３只大鼠随机分为对照组和急性肝衰（ＦｕｌｍｉｎａｎｔＨｅｐａｔｉｃＦａｉｌｕｒｅ，ＦＨＦ）组，手术制成外科型ＦＨＦ模型，用血液生化检测、同位素扫描、组织形态观察，证明制作肝衰模型造成肝脏形态和功能损害外，还导致大鼠肺、肾、脑、心、肠的结构和功能均发生明显损害，并发生多脏器功能衰竭（ＭＯＦ）。其发生原因可能与肝脏网状内皮系统屏障功能削弱，内毒素血症介导的重要脏器贯序损伤有关     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因表达对人肝癌细胞的生长抑制

使用转导有单纯疱疹Ⅰ型病毒胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因的人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞株建立了裸鼠移植瘤模型，并进行了在体和体外试验性无环鸟苷（ＡＣＶ）治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ＡＣＶ的敏感性，肝癌细胞生长抑制与ＡＣＶ的剂量有关；用药组裸鼠除平均瘤重明显低于对照组外，还可见细胞核分裂指数降低，伴有细胞变性和坏死。结果表明：ＨＳＶ１－ＴＫ基因经逆转录病毒转导后，用ＡＣＶ诱导表达明显抑制了人肝癌细胞的生长。     

随机市场利率的债券定价

在分析传统的收入资本化定价法的基础上，对市场利率的行为作了市场利率的波动服从一扩散过程（布朗运动）的随机性假凤；运用套期保值和套利定价的方法，推导了贴息债券和附息债券的定价程；分析表明它们的价格方程均为偏微分方程，与Ｂｌａｃｋ－Ｓｃｈｏｌｅｓ的期权定价方程有相同的结构。     

β-分泌酶底物肽反转录病毒载体及其包装细胞株的构建

目的用pLXSN反转录病毒载体构建介导β-分泌酶底物肽(BACEsp)基因表达的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立高效、稳定表达BACEsp的包装细胞株。方法根据BACEsp基因序列设计引物,PCR合成的BAC-Esp片段和pLXSN载体用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切后连接,构建成表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体。用脂质体介导转染PT67包装细胞,经抗性筛选后,挑单克隆扩大培养,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株。结果经酶切、连接后构建成的质粒称为pLXSN-BACEsp,经测序证实构建成功,无任何碱基突变。经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度的细胞集落,扩大培养后建立BAC-Esp高效表达的包装细胞株。结论成功构建了能表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立了稳定、高效地产生有活性的BACEsp产毒包装细胞株。