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1.
CD25分子胞外段基因免疫应答中B淋巴细胞的变化及意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 用鼠CD25分子胞外段基因疫苗免疫Balb/c小鼠,观察其诱导的体液免疫应答中B淋巴细胞的变化并探讨其意义.方法 用pcDNA3.1-CD25胞外段真核表达质粒分别在第0天、第10天和第20天肌肉注射免疫同系Balb/c小鼠,酶联免疫法(ELISA)检测抗CD25胞外段的抗体水平及亚型,FACS检测脾细胞中B淋巴细胞的比例变化及细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ的表达变化.结果 与对照组相比,CD25胞外段基因免疫组小鼠血清抗CD25抗体在免疫后逐渐升高,第30天达最高峰;抗CD25抗体主要以IgG1为主;免疫小鼠脾细胞中B细胞的比例变化不显著(P>0.05),但高分泌IL-4和IL-10(P<0.05),而低分泌IFN-γ(P<0.05).结论 CD25胞外段蛋白基因免疫中B细胞功能变化显著,这为后续深入研究体液免疫应答在T细胞疫苗中的作用提供了前期实验基础.  相似文献   

2.
目的 探讨谷氨酰胺对严重烧伤患者肠黏膜屏障作用的影响.方法 将入选的严重烧伤病例分为对照组和治疗组,治疗组伤后应用谷氨酰胺颗粒10 g口服,3次/d,对照组接受安慰剂.于烧伤后第1、3、7、14天检测各组患者外周血二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸、血清IgG、IgM、CD4+/CD8+及转铁蛋白.结果 与对照组相比,治疗组烧伤后外周血DAO和D-乳酸水平无明显增高,在第7、14天均显著低于对照组;烧伤后第14天血清IgG、IgM、CD4+和CD4+/CD8+均显著高于对照组;烧伤后第7、14天转铁蛋白水平亦高于对照组.结论 应用谷氨酰胺能够对严重烧伤后肠黏膜屏障起到保护作用,同时也能在一定程度上促进患者免疫功能和营养状态的改善.  相似文献   

3.
用细胞培养技术,观察了中药川芎嗪对培养脑微血管内皮细胞间粘附分子(IntercellularAdhesionMolecule-1,ICAM-1)表达的影响。细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和脂多糖(LPS)作用24h,使内皮细胞ICAM-1表达上调,预先用中药川芎嗪注射液处理3Omin,再用相同的细胞因子刺激,ICAM-1表达不升高。提示川芎嗪可抑制TNF-α和LPS引起的ICAM-1表达增加。  相似文献   

4.
目的 探讨自身免疫性甲状腺病发生的免疫机制,明确在Graves病(Gravs,disease,GD)和桥本氏甲状腺炎(hashmotos sthyroiditis,HT)甲状腺内Thl/Th2平衡偏移在发病中的作用。方法 用免疫组化染色方法检测13例GD、12例HT患者甲状腺内浸润单个核细胞IFN-γ、IL--4细胞因子抗原表达,并检测这些患者外周血甲状腺刺激抗体、甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体免疫学指标。结果与正常对照组相比,GD、HT患者甲状腺内浸润单个核细胞IL--4、IFN-γ阳性表达高于正常(P<0.05);GD组Th2类细胞因子IL--4阳性表达明显高于Thl类细胞因子IFN-γ阳性表达(P<0.01);而HT组TN类细胞因子IFN-γ阳性表达明显高于Th2类细胞因子IL-4阳性表达(P<o.01);GD患者的IL--4阳性表达均与甲状腺刺激抗体显著正相关(r=0.67);HT患者的IFN-γ阳性表达均与甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体呈显著正相关关系(r=0.68,r=0.57)。结公GD患者甲状腺以分泌IL--4的Th2浸润为主,而HT患者甲状腺以分泌IFN-γ的Thl浸润为主,AITD的发病与Thl汀h2平衡偏移及其分泌的Thl/Th2细胞因子有着内在的联系。  相似文献   

5.
目的 研究安非他明(AM)对细菌脂多糖(LPS)刺激后小鼠白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)释放的影响以及多巴胺D3受体在此过程中参与的调控作用.方法 实验Ⅰ:采用多巴胺D3受体基因敲除小鼠(D3RKO)以及具有相似遗传背景的野生型小鼠(C57BL/6J),腹腔注射AM(5 mg/kg)10 min后再注射LPS(150 μg/kg)刺激,在LPS给药后不同时间点(0、30、60、90、120、240 min)心脏穿刺抽血进行IL-10测试,观察上述不同时间点D3RKO和C57BL/6J小鼠IL-10的分泌情况.实验Ⅱ:在实验Ⅰ所确定的小鼠IL-10分泌最高时间点,观察不同剂量AM (0、2、5、10 mg/kg) 对D3RKO和C57BL/6J小鼠IL-10分泌的影响.结果 实验Ⅰ:AM 5 mg/kg在LPS注射后可以引起D3RKO和C57BL/6J小鼠IL-10分泌增多,其中60 min达最大值,与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).实验Ⅱ:C57BL/6J小鼠以AM 5 mg/kg作用后IL-10增多最为显著,D3RKO小鼠以AM 2 mg/kg作用后IL-10升高最为显著,与生理盐水对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且二者之间亦存在统计学差异.结论 AM对小鼠免疫功能的抑制可能是通过增加IL-10分泌而起作用;小剂量AM即可引起D3RKO小鼠血中IL-10升高,提示多巴胺D3受体可能参与了AM对小鼠免疫功能抑制作用的调控.  相似文献   

6.
目的研究甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)对脂多糖(LPS)诱导小鼠血清和脾脏IL-1β、IL-6和TGF-β表达的影响。方法选用C57BL/6小鼠,模拟人类药物成瘾模式,分段式渐进性递增剂量隔天给予小鼠腹腔注射(i.p.)METH(第1周0.5mg/kg、第2周1.0mg/kg、第3周2.0mg/kg、第4周4.0mg/kg)或生理盐水(10.0mL/kg),在最后一剂METH之后24h给小鼠i.p.LPS(0.33mg/kg)或生理盐水(10.0mL/kg),给予LPS 2h后摘除眼球采血并分离脾脏,检测血清及脾脏匀浆中IL-1β、IL-6和TGF-β的表达水平。结果METH单独作用使血清中TGF-β的表达显著下降(P<0.001),对IL-6的表达没有影响;给予LPS刺激后,METH使小鼠血清中IL-6的表达显著升高(P<0.001),对TGF-β的表达没有影响;而IL-1β在血清中表达水平较低,未检测到。在脾脏中,METH单独作用对IL-1β、IL-6和TGF-β的表达没有影响;给予LPS刺激后,METH显著升高了IL-6的表达水平(P<0.001),而使TGF-β的表达明显下降(P<0.001),IL-1β的表达水平没有变化。结论 METH作用可以改变LPS诱导小鼠血清和脾脏IL-1β、IL-6和TGF-β的表达水平。  相似文献   

7.
目的 探讨合生元治疗烧伤后肠源性感染的机制,为烧伤后肠源性感染的防治探求新途径。方法 动态检测大鼠体内的肠道示踪菌JM109易位率和血浆中LPS水平。结果 合生元治疗组大鼠体内JM109易位率以及血浆LPS水平明显低于烧伤对照组。结论 合生元能够快速补充肠道生理性厌氧菌,坚固肠粘膜外微生物屏障,阻止肠道条件致病菌和LPS经肠壁进入机体组织,对烧伤后肠源性感染有一定的预防和治疗作用。  相似文献   

8.
自身免疫性甲状腺病甲状腺内Th1/Th2平衡偏移研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨自身免疫性甲状腺病发生的免疫机制 ,明确在Graves病 (Graves’disease ,GD)和桥本氏甲状腺炎(hashimoto’sthyroiditis,HT)甲状腺内Th1/Th2平衡偏移在发病中的作用。 方法 用免疫组化染色方法检测 13例GD、12例HT患者甲状腺内浸润单个核细胞IFN γ、IL 4细胞因子抗原表达 ,并检测这些患者外周血甲状腺刺激抗体、甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体免疫学指标。结果 与正常对照组相比 ,GD、HT患者甲状腺内浸润单个核细胞IL 4、IFN γ阳性表达高于正常 (P <0 .0 5 ) ;GD组Th2类细胞因子IL 4阳性表达明显高于Th1类细胞因子IFN γ阳性表达 (P<0 .0 1) ;而HT组Th1类细胞因子IFN γ阳性表达明显高于Th2类细胞因子IL 4阳性表达 (P <0 .0 1) ;GD患者的IL 4阳性表达均与甲状腺刺激抗体显著正相关 (r =0 .6 7) ;HT患者的IFN γ阳性表达均与甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体呈显著正相关关系 (r=0 .6 8,r=0 .5 7)。结论 GD患者甲状腺以分泌IL 4的Th2浸润为主 ,而HT患者甲状腺以分泌IFN γ的Th1浸润为主 ,AITD的发病与Th1/Th2平衡偏移及其分泌的Th1/Th2细胞因子有着内在的联系  相似文献   

9.
目的 将抗人CD3单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因转染到HeLa细胞 ,进行真核表达和活性测定。方法 将抗人CD3scFv /人 p5 3四聚功能域融合基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果 表达产物经SDS PAGE和Westernblot证实 ,为Mr约35 0 0 0的特异蛋白条带。纯化后经流式细胞仪检测 ,可特异性地结合人外周血单个核细胞 (PBMCs) ,亲和力高于scFv。结论 获得了可与PBMCs特异性结合的抗人CD3scFv四聚体 ,为进一步临床应用奠定了基础  相似文献   

10.
目的 观察甲状腺刺激性抗体 (TSAb)对甲状腺细胞过氧化物酶活性 (TPO)的影响及该作用所通过的信号传导途径 ,探讨TSAb导致Graves病的分子机制。方法 以原代培养人甲状腺细胞为研究对象。采用生物学法检测TSAb活性 ;应用改良愈创木酚氧化法检测TPO活性 ;同时应用信号传导抑制剂阻断各传导途径 ,分别观察蛋白激酶A(PKA)抑制剂、BAPTA AM(细胞内Ca2 +鳌合剂 )、TPK(酪氨酸蛋白激酶 )抑制剂木黄酮对TSAb作用下TPO活性的影响。结果 ①新鲜分离的甲状腺细胞TPO活性最高 ,此后逐渐下降 ,培养第 6天已基本降至最低 ;②TSAb作用 12h可使TPO活性开始增加 ,随时间延长 ( 12~ 4 8h) ,TPO活性逐渐增强 ,高峰时间为 4 8h ,持续 72h仍可见明显的刺激效应。 1mg·mL-1TSAb即可使TPO活性增加 ,以后随剂量增加TPO活性逐渐增强 ,4mg·mL-1作用基本达最大。 4mg·mL-1TSAb作用 4 8h可使甲状腺细胞TPO活性增加约 36 0 % ;③PKA抑制剂阻断cAMP/PKA途径 ,可使TSAb作用的TPO活性增加减少近 79.2 % (P <0 .0 1) ,BAPTA AM阻断PIP2 /Ca2 +(磷酸酰肌醇 /钙离子 )途径及木黄酮阻断TPK途径 ,均对TPO活性无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论 TSAb通过激活cAMP/PKA途径导致TPO活性增加 ,甲状腺细胞合成激素功能亢进。这可能是TSAb致Grav  相似文献   

11.
目的 探讨炎前因子在过敏性紫癜免疫病理损伤中的作用。方法 采用双抗体夹心ELISA法和硝酸还原酶化学比色法分别检测过敏性紫癜 (SHP)患儿血清肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素 6(IL 6)、白细胞介素 8(IL 8)和一氧化氮 (NO)的浓度。结果 SHP急性期血清 4种炎前因子水平明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。肾型中活动性肾脏病和 (或 )肾功能不全组较其他组血清IL 6明显升高 (P <0 .0 1 )。恢复期TNF α、IL 8仍高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。急性期 4种炎前因子间呈正相关关系。结论 血清 4种炎前因子水平与SHP的发生、发展有关。  相似文献   

12.
目的观察双侧股动脉-股静脉无泵驱动体外膜肺(bAV-ECMO)治疗急性呼吸衰竭(ARF)犬过程中血浆和肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内皮素-1(ET-1)的变化。方法10只犬在建立ARF模型情况下给予bAV-ECMO治疗。分别于实验各时段提取肺组织及血浆,应用放射免疫技术检测TNF-α、ET-1的变化。结果模型动物血浆ET-1含量先降低,1 h后开始回升,2 h达到高值;肺组织匀浆ET-1含量增加在转流2 h达到高值。方差分析表明匀浆和血浆各自ET-1的均数在转流前后有显著性差异(P<0.05)。肺组织匀浆和血浆TNF-α含量转流3 h后均较术前有所增高,但都呈现出先降低后升高的趋势。方差分析表明匀浆和血浆中各自TNF-α的均数在转流前后有显著性差异(P<0.05)。结论bAV-ECMO早期转流可能减少ET-1的释放;而TNF-α在转流早期对于ET-1释放影响不大。  相似文献   

13.
Objective To explore the roles of cytokines in the pathogenesis of hemorrhagic fever with renal syndrome(HFRS). Methods Double-antibody sandwich ELISA was used to determine serum interleukin (IL)-6, urine tumor necrosis factor (TNF), IL-6 and IL-8 levels in 56 patients with HFRS. Results Serum IL-6, urine TNF, IL-6 and IL-8 concentrations in HFRS patients were significantly higher than those in control group, respectively (P〈0. 001). The concentrations increased at fever stage, then continued to increase during hypotension stage and peaked at oliguria stage. The concentrations of serum IL-6, urine TNF, IL-6 and IL-8 increased in accord with the severity of the disease and differed greatly among different types of the disease. Serum IL-6 had remarkable relationships with serum specific antibodies. It was positively related to serum β2 -microglobulin (β2 -MG), blood ureanitrogen (BUN) and creatinine (Cr). Significant positive relationships were also found both between urine IL-6 and TNF, and between IL-6 and IL-8 (r=0.5768, P〈0.05; r=0. 3760, P〈0.01). Conclusion TNF, IL-6 and IL-8 activated during the course of the disease. IL-6 is associated with the immunopathological lesions caused by the hyperfunction of humoral immune response. IL-6, IL-8 and TNF are involved in the renal immune impairment. Determining them might, in certain extent, be used in predicting the prognosis and outcome of patients with HFRS.  相似文献   

14.
人骨髓间充质干细胞生物学特性及腺病毒介导的GFP标记   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分离、培养以及鉴定的方法,同时应用腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)检测细胞转染的效率。方法应用人淋巴细胞分离液(Ficoll)对hMSCs进行分离,经贴壁纯化后用MTT法检测增殖能力;并对其成骨、成脂、成平滑肌诱导分别进行碱性磷酸酶(ALP)、油红O染色及α-SMA免疫细胞化学检测;采用流式细胞仪(FCM)检测细胞表面标志的表达。用Ad-GFP转染,并应用荧光显微镜与FCM检测转染效率。结果 hMSCs镜下为成纤维样形态,约在第4天进入对数增长期;分化诱导后ALP染色、Von kossa银染、油红O染色以及α-SMA均为阳性;FCM检测CD14、CD31、CD45表达阴性,CD44、CD73、CD106及PDGFRβ表达阳性;当感染复数MOI=200,细胞培养48h时感染效率较高,FCM检测显示为99.81%。结论经过对增殖、分化能力以及表面标志的分析,证明用Ficoll可以分离得到较纯的hMSCs,Ad-GFP可以很好地感染细胞,为组织工程种子细胞的体内示踪提供了途径。  相似文献   

15.
Objective To examine antisense and decoy oligonucleotides of nuclear factor kappa B in vivo effects on intima proliferation and balloon-injured monocytes chemotactic protein-1 ( MCP-1 ) and extracellular signal regulated kinase-2 ( ERK2 ) expression in the carotid artery of rats. Methods Sprague-Dawley rats underwent balloon-dilation injury of the left carotid artery. Rats are divided into 7 groups ( n = 18 ) and each group includes 6 time points (6 h, 1, 3, 5, 7, 14 d) ( n =3). Uninjured right carotid artery of the same rat was used as controls. Results In model group, sense group and scramble group, vessel intima area , media area and intima/media ratio increased after 5 d and reached the maximum after 7 d. The effect of antisense plus decoy group on intimal hyperplasia was more obvious than that of antisense group and decoy group alone. MCP-1 mRNA expression was increased expression continuously at 3, 5 and 7 d and decreased at 14 d. Compared with model group, sense group and scramble group, antisense group, decoy group and antisense plus decoy group had lowered MCP-1 mRNA expression in each time point ( P < 0. 05 ). NF-κB p65 was dispersed positive stain 6 h after injury and increased after 1 d and peaked at 7 d, but the protein expression was weak at 14 d. ERK2 protein synthesis increased at 1 d and reached the peak at 7 d, while protein expression after 14 d was similar to that at 7 d. Treatment of antisense group,decoy group and antisense plus decoy group inhibited protein synthesis more significantly than those of model group,sense group and scramble group ( P < 0. 05 ). Conclusion NF-κB modulates genes expression and protein synthesis of MCP-1 and ERK2. Celluar proliferation in vessel wall was dynamically changed after balloon angioplasty injury. Antisense and decoy oligonucleotide of NF-κB by local lipofectamine transfer inhibit NF-κB activating gene modulation and neointimal hyperplasia.  相似文献   

16.
甲基苯丙胺急性处理对小鼠脾脏细胞因子的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的研究甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)急性处理对LPS诱导的小鼠脾脏IL-6、IL-10和TNF-α表达的影响。方法选用C57BL/6J小鼠,分别腹腔注射(intraperitoneally,i.p.)生理盐水(NS)或MA(5mg/kg),10min后,再分别i.p.NS和LPS(150μg/kg),予LPS后30min和60min,取脾脏,检测这两个时间点小鼠脾脏IL-6、IL-10和TNF-α的水平。结果 MA可显著提高LPS诱导的脾脏IL-6和IL-10的表达(P<0.01)。对于脾脏IL-6的水平存在MA+LPS的交互效应(P<0.01),在i.p.LPS 60min后MA+LPS组脾脏IL-6水平较NS+LPS组明显升高(P<0.01)。对于脾脏IL-10的水平也存在MA+LPS的交互效应(P<0.01),在i.p.LPS 30min后MA+LPS组脾脏IL-10水平较NS+LPS组明显升高(P<0.01)。对于TNF-α,在这两个时间点既无显著的MA的主效应,也无MA+LPS的交互效应,MA组较NS组几乎没有差异(P=1.00)。同一组别两个时间点的比较发现,无LPS刺激,小鼠脾脏IL-6、IL-10和TNF-α的水平在两个时间点无差异;给予LPS刺激,i.p.LPS后60min小鼠脾脏IL-6、IL-10和TNF-α的水平较30min显著增高(P<0.01)。结论 MA处理小鼠后短时间内可显著增加LPS诱导的脾脏IL-6和IL-10的表达,但对TNF-α表达无影响。  相似文献   

17.
探讨细胞因子在 Graves′病发病中的作用。方法 利用高敏感固相增敏免疫分析方法 ( EASIA)测定了 36例 Graves′病伴甲亢患者 ,1 9例未治亚急性甲状腺炎和 2 8例正常人血清 IL- 6、IL- 8水平。结果  GD患者血清 IL- 6、IL- 8浓度高于正常人水平 ( P1<0 .0 5,P2 <0 .0 5)。 IL- 6升高的 GD患者占 2 2 .2 2 % ( 8/36)。 IL - 6水平与 IL- 8不相关 ( P >0 .0 5)。 IL - 6水平与 TGA、MCA和 TRAb不相关 ,与 T3 也不相关。此外 1 9例未治亚急性甲状腺炎 ( SAT)患者血清 IL - 6水平也高于正常人 ( P <0 .0 5)。结论 在 GD患者发病中存在 IL - 6、IL - 8系统的参与  相似文献   

18.
Objective To construct eukaryutic expression vector of HPV18 L1- E6, E7 chimeric gene and examine the humorul and cellular immune responses induced by this DNA vaccines in mice. Methods The C-terminal of major rapsid protein L1 gene and mutant zinc finger domains of early E6/7 oncogenes in HPV18 were integrated and inserted into eukaryotic expression vector pVAX1 to generate vaccines pVAX1-L1E6Mxx, ETMxx. CHO cells were transiently transfected with the individual construct. Target protein expressions in the lysate of the transfected cells were measured by ELISA and immunocytochemistry After BALB/c mice were vaccinated with various recombinant plusmids(pVAX1- L1-E6M3 or pVAX1-L1-E7M3 ) and immunie adjuvants (pLXHDmB7-2 or LTB) through different administration routes (intramuscular or intranasal) , the great cellular immune responses were produced us revealed by delayed-type hypersensitivity (DTH) and lymphocyte proliferation, and the expression of IL-4 and IFN- 7 cells in CD4^+ and CD8^+ subpopulations. Results The highly efficient expression of pVAX1-L1E6Mxx, E7Mxx vector in host eukaryotic cells were demonstrated both by ELISA and immunocytochemistry. The level of specific serum IgG against HPV in experiment groups mice was much higher than that of control group, and intranuscular immunization group had the highest antibody level. Intramuscular immunization groups were superior to intranasal immunization groups in DTH response, splenocyte proliferation and CD8^+ IFN-γ^+ cells number, but CD4^+ IL4^+ cell number was higher in intranasul immunization groups. The immunization groups using pLXHDmB7.-2 as adjuvant were superior to other groups in immunorespouse. Conclusion These DNA vaccines produce remarkable cellular and humorul immune responses in the mouse and may provide us prophylatic and therapeutic candidates for HPV induced cancer treatment.  相似文献   

19.
Objective To investigate calcitonin gene-related peptide (CGRP) involvement in the process of aseptic loosening. Methods We isolated fibroblasts from periprosthetic pseudocapsular tissue at the time of revision hip arthroplasty performed due to aseptic loosening. Fibroblasts were incubated for 24 h in the presence of CGRP, and the levels of interleukin (IL)-1β, IL-6, and tumor necrosis factor (TNF)-α in the media were determined using enzyme-linked immunosorbent assay kit. Results We found that the levels of IL-1β, IL-6, and TNF-α increased in a time- and concentration-dependent manner. ConclusionThese inflammatory cytokines play an important role in the development of periprosthetic osteolysis and implant loosening. Our results suggest that CGRP may be involved in the pathogenesis of aseptic loosening.  相似文献   

20.
用肿瘤坏死因子(TNF)、雌激素受体(ER)的单克隆抗体对46例卵巢上皮肿瘤及10例正常卵巢新鲜组织的冰冻切片,进行TNF、ER免疫组化ABC法测定。结果:卵巢囊腺癌TNF及ER表达的阳性率高于卵巢囊腺瘤;临床分期越晚,TNF及ER表达强度越高。表明卵巢上皮性肿瘤TNF及ER表达与其组织学类型及临床分期有关。提示TNF在卵巢癌中的表达可预测预后,ER的表达可指导卵巢肿瘤内分泌治疗。  相似文献   

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